بررسی گونه های آلترناریا در کلزا از لحاظ مرفولوژیکی بیماریزایی و مولکولی در استان های خوزستان و کرمانشاه

بیماری لکه برگی آلترناریا یکی از بیماری های مهم کلزا می باشد که باعث کاهش فتوسنتز در کیاه شده و منجر به پایین آمدن عملکرد گیاه می شود به منظور مطالعه این بیماری در اسنان های خوزستان(دزفول،شوش، اندیمشک، شوشتر،اهواز،گتوندوایذه) و کرمانشاه(صحنه،کنگاور واسلام آباد غرب) این پژوهش در خلال سال های 86-88 به مرحله اجرا درآمد. در این مطاله از مزارع عمده کلزا بازدید بعمل آمده واز گیاهان دارای علائم بیماری نمونه برداری صورت گرفت سپس نمونه های آلوده در پاکت های کاغذی به آزمایشگاه منتقل گردید. این نمونه ها با آب معمولی ابتدا شسته شده ، سپس قطعاتی کوچکی از مرز بین نواحی سالم و آلوده جدا و بمدت 2-3 دقیقه با هیپو کلریت سدیم ضدعفونی سطحی شده وچند بار آب مقطر سترون شستشه شده ودر نهایت با کاغذ صافی خشک شدند و سپس به ظروف کشت حاوی pca,pda منتقل شدند. ظروف کشت در انکوباتور با دمای 25 درجه سانتیگراد نگهداری شده، پس از ظهور پرگنه و اسپورگذاری جدایه ها با روش تک اسپور خالص سازی گردیدند.جدایه های خالص شده(195 جدایه) به محیطط کشت pca منتقل ودرانکوباتور با دمای 23-24 درجه سانتیگراد وشرایط نوری-تاریکی(هشت ساعت-شانزده ساعت)قرار گرفتندپس از 7-5 روز اقدام به شناسایی جدایه ها با استفاده از کلید سیمونز(2007)شد واین گونه ها عبارتند از:a. alternata, a.infectoria,a. arborecence,a. tenuissima, a. japonica,a. brassicicola.گزارش گونهa. tenuissimaاز روی کلزا در ایران جدید می باشد ونیز گزارش a. brassicicolaاز روی کلزا در استان خوزستان نیز برای اولین بار از این استان گزارش می شود. ییماریزایی گونه های فوق روی کلزادر شرایط مزرعه مورد مطالعه قرار گرفت و آنها در چهار گروه قرار گرفتند. گروه یک: گروه غیر بیماریزاa. infectoria، گروه دو که دارای بیماریزایی کم بودند شامل گونه های a. arborecence,a. tenuissima,a. alternata گروه سه با بیماریزایی متوسط شامل گونه a. japonica وگروه چهار دارای بیماریزایی زیادa. brassicicola میباشند. به منظور بررسی تنوع ژنتیکی استخراج dnaژنومی به روش ریدر و برودا بر روی میسلیوم های رشد در محیط کشت مایع psb انجام شد.سپس آغازگرهای(gva#30,igs27) برای تکثیر منطقه igs جدایه های قارچی مورد بررسی بکار گرفته شد. هضم آنزیمی محصولات pcr با هریک از آنزیم های alui,drai,mspi براساس توصیه شرکت سازنده آنزیم هاانجام شد.الگوی حاصل ازهضم آنزیمی قطعات با برنامه نرم افزاری ntysis ver2/2 مورد تفسیر قرار گرفت.